當前位置：干貨！Elisa試劑盒的使用技巧及經驗分享
點擊次數：1159 更新時間：2020-10-27
Elisa試劑盒的使用技巧和經驗：
一、剩余的試劑盒材料要妥善保存
標準品分裝后按說明書要求的溫度保存，這樣可以避免污染，對要求冷凍保存的標準品還可以避免反復凍融；酶標板放回錫箔紙袋，加入干燥劑，封緊封口，4℃保存。忌未將酶標板*平衡至室溫，就放回錫箔紙袋，因為此時由于溫度差，酶標板上會有水汽，不利于穩(wěn)定保存。
二、預實驗：通常預實驗包括全部標準曲線和小量樣本。
預實驗有兩個主要目的，一來是熟悉實驗流程，發(fā)現(xiàn)可能忽略的問題；二來是測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現(xiàn)不匹配的情況，不至于浪費過多樣本。另外是對樣品中目的分析物的豐度作一下大致了解，以確定合適稀釋度。
三、加樣要快速準確，避免氣泡
加樣時間宜控制在 5 分鐘內。加樣前要將樣本混勻，特別是凍存后融化的樣本(自然融化的血清等樣本會有分層現(xiàn)象)，應上下顛倒充分混勻，注意動作輕緩，避免產生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀，可以再次離心。整個加樣過程都要注意避免產生氣泡。氣泡會影響蛋白的相互結合，而影響反應進行。
四、孵育時要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干
孵育時壓緊封口膜。多塊板一起實驗時，要平放各板，不要疊放，以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應。
五、手動洗板的操作指南
加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板，選用無粉塵和碎屑的優(yōu)質吸水紙。需要用力拍板，使孔內沒有可見液體掛壁；但也不能太重，不能讓樣品干太久。酶標板拍干后立即做后續(xù)的加液。
六、顯色反應的關鍵點
ELISA試劑盒實驗是個酶促底物顯色反應，隨時間增加，顯色變深，所以選擇較佳時間終止反應是得到準確的標準曲線和樣本濃度的重要因素。終止過程要*。使用的 TMB 底物時*終止點是黃色，不會有任何程度的藍色或綠色，終止過程中必要時可以震蕩96孔板，或用槍頭抽吸混勻(終止液含強酸，避免腐蝕)。
