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技術(shù)文章

大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒實驗原理和操作方法
點擊次數(shù):882 更新時間:2017-03-07

PⅢNP Elisa試劑盒實驗原理
大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠血栓素B2(TXB2)水平。用純化的大鼠血栓
素B2(TXB2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血栓素
B2(TXB2),再與HRP 標(biāo)記的血栓素B2(TXB2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,
經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下
轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血栓素B2(TXB2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm
波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠血栓素B2(TXB2)濃度。

PⅢNP Elisa試劑盒操作步驟
. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
320 ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60 ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80 ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40 ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 ng/L 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
5 分鐘.
0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
. PⅢNP Elisa試劑盒測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后5 分鐘以內(nèi)進行。

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